Vsebina
Tuberkuloza je nalezljiva bolezen, ki jo povzroča bakterija Mycobacterium tuberculosis, in je bolezen dihal, za katero so značilne tvorbe gomoljev, nekroza, abscesi, fibroza in kalcifikacija v pljučih. Okuži lahko tudi ledvice, bezgavke, kosti, sklepe in kožo.
Primarna laboratorijska diagnoza tega bacila vključuje njegovo obarvanje za vizualizacijo bakterij pod mikroskopom. Izbrani vzorec je izpljunek ali bronhoalveolarni izpiranje za prepoznavanje okužbe dihal ali vzorec dejanskega tkiva.
Fiziologija
Mycobacterium tuberculosis je paličasti organizem (bacili), ki ni premična, neobvezna spora. Ta bakterija je dolga 0,4x3 mikrometra in je vsakih 15 do 24 ur podvržena binarni cepitvi (delitvi reproduktivne celice), kar v primerjavi z drugimi bakterijami velja za počasno. Zaradi tega lahko traja do devet tednov, da se mikobakterija pojavi v gojišču.
Ta organizem je občutljiv na UV svetlobo in toploto (na primer pasterizacija), vendar se upira kemičnim razkužilom.
Madež po Gramu
Mycobacterium tuberculosis ni mogoče zares razvrstiti med gram pozitivne ali gram negativne. Ta razvrstitev temelji na količini peptidoglikana v celični steni bakterije. Gram pozitivna vrsta ima debelo plast te molekule (približno 90%), gram negativna vrsta pa tanko (od 5% do 20%). Gramovi madeži prodrejo v celično steno in se vežejo na kemične sestavine v njej. Pod mikroskopom bodo obarvane bakterije postale vijolične ali rožnate.
Pri mycobacterium tuberculosis je celična stena sestavljena iz peptidoglikana, pa tudi zapletenih lipidov, ki zavirajo prodiranje grama barvila. Tudi celična stena se upira razbarvanju s kislino ali alkoholom, zato se mikobakterija imenuje "odporna proti kislinam". Lipidi celičnih sten so mikolična kislina, strunski faktor in D-vosek. Če bi bakterije obarvali, bi bile celice videti pozitivne ali rahlo blede z zelo malo barve.
Za ogled bakterij je treba uporabiti posebne madeže, kot sta madež Aumarine ali Zhiel-Neelson.
Madež iz aumarin-rodamina
Postopek z uporabo auramin-rodamina uporablja rumeno fluorescentno barvilo za vizualizacijo mikobakterije tuberkuloze pod fluorescenčnim mikroskopom. Kot kontrastno barvilo lahko uporabimo kalijev permanganat ali akridin oranžno. Pod lečo bodo bakterijske celice videti zelene.
Barvilo auramin-rodamin je bolj občutljivo kot Zhiel-Neelson in bolj ekonomsko upravičeno.
Ziehl-Neelsonovo barvanje
Madež Ziehl-Neelson so ustvarili znanstveniki Franz Ziehl in Friedrich Neelsen in uporablja ogrevan karbol-fuksin, visoko koncentracijo kislega alkohola in kontrastno barvilo, kot sta zeleni malahit ali metilen modra. Pod fluorescenčnim mikroskopom bodo bakterijske celice videti svetlo roza.
Barvilo Ziehl-Neelson je standard odličnosti za predhodno identifikacijo mycobacterium tuberculosis in mycobacterium leprae.
Agar
Poleg identifikacije mikroskopije je treba mikobakterijo tuberkulozo gojiti na posebni agar kulturi. Želatina Lowenstein-Jensen vsebuje zapletene organske snovi (na primer jajca in krompir), soli, glicerol in malahitno zeleno (ki zavira druge bakterije). Antibiotike lahko dodamo za nadaljnje zaviranje onesnaževalnih mikroorganizmov. Vzorec položimo na ta agar, bakterije pa rastejo v treh do devetih tednih.
Raztopino hranilne kulture, kot sta albumin in biotin, lahko uporabimo za podporo rasti tudi najmanjše količine ciljnih bakterij. To je znano kot Middlebrook 7H9 (ali 7H12).
V obeh medijih bodo kolonije videti kot majhne, polirane, svetlo rjave kolonije.
Z napredno tehnologijo lahko mikobakterijo tuberkulozo zdaj gojimo z avtomatiziranim čitalnikom. Za spremljanje rasti in poročanje o pozitivni ali negativni okužbi se uporabljata tekoča raztopina medija Middlebrook 7H9 in fluorescentna indikatorska spojina.