Kako pripraviti hranilni agar v petrijevkah

Vsebina

Navodila
Kako
Kaj potrebujete

Hranilna brozga se uporablja za gojenje bakterij, kot je Escherichia coli. Recepti za to juho se razlikujejo glede na vrste bakterij, pa tudi na prisotnost genskih sprememb, kot je npr. Odpornost na antibiotike. Juho lahko strdimo z dodatkom agar-agarja, ki bakterijam omogoča tvorbo ločenih kolonij, medtem ko se v tekoči kulturi preprosto razpršijo po volumnu. To je osnovna tehnika, vendar bistvena za napredne metode, kot so kloniranje genov ali mikrobiološki testi. Ta dokument predvideva, da bodo laboratorijski sevi bakterije Escherichia coli gojeni v agarnih ploščah Luria broth (ali petrijevkah).

Navodila

Petrijeve plošče (Jupiterimages / Comstock / Getty Images)

Izmerite 10 g bakterijskega triptona, 5 gramov ekstrakta kvasa, 5 gramov natrijevega klorida, 15 gramov agarja ali agaroze in 1 ml 1N natrijevega hidroksida. Zmešamo jih s sterilnim, avtoklaviranim volumnom destilirane vode, dokler ne dobimo 1 litra medija. Medij se avtoklavira v steklenicah ali polokončanih bučkah za 25 minut. Pustimo, da se ohladi na približno 50 ° C, preden dodamo reagente, ki jih lahko uniči visoka toplota, kot so antibiotiki ali drugi prehranski dodatki.
Pustimo, da se avtoklaviran medij ohladi na 50 ° C in ne manj kot 45 ° C, saj se bo agar pred iztokom zalil. Pridobite sterilne petrijevke in nalijte dovolj, da pokrijejo celotno površino in vsaj polovico globine. Izogibajte se prenapolnjevanju in po možnosti ne pustite, da agar doseže zgornji rob plošče. Počakajte na strjevanje v sterilnem okolju (na primer pod laminarno pretočno komoro), pri čemer naj bodo pokrovi odprti in en vogal pokrova.
Posušite plošče. Čeprav se lahko uporabijo takoj, ko so trdne, bo na površini agarja prisotna nekaj vlage, ki bo preprečila zadostno lepljenje kolonij bakterij. Zato je bolje, da plošče posušite pred nanosom bakterij, na primer tako, da jih pustite pri sobni temperaturi nekaj dni ali pol ure pod laminarno pretočno komoro ali v inkubatorju s 37 ° C.
Shranite plošče. Posušene plošče je treba zložiti z glavo navzdol (obrnjene) in ponovno vstaviti v originalno embalažo, zapečatiti s trakom in zaviti v folijo, da se zaščitijo pred svetlobo ali v primerni posodi. Vedno napišite datum priprave in se izogibajte uporabi, če so plošče stare več kot dva meseca.

Kako

Izvedite toliko prejšnjih korakov (po možnosti vse) v sterilnem okolju (na primer pod plamenom ali laminarnim pokrovom), da preprečite, da bakterijski onesnaževalci v zraku vstopijo in rastejo v mediju.